GFP(绿色荧光蛋白)和YFP(黄色荧光蛋白)可不可以共用一款荧光蛋白激发光源,首先这得看GFP和YFP的***佳激发波长是否一样,另外得看激光光源本身是不是具备多种波段。
GFP和YFP激发波长
绿色荧光蛋白 (GFP) 是一种 β-桶状蛋白 ,由 238 个氨基酸组成,分子量约为 27 kDa。GFP 是从水晶水母 Aequorea victoria 分离而来。GFP 可通过能量转移,将水母发光蛋白通过化学作用发出的蓝色荧光转变为绿色荧光。GFP 的激发波长为 488 nm,并在约 507 nm 处有一个发射峰。同时,对 GFP 的高分辨率晶体结构研究,使得科学家们能操纵其蛋白结构,改造出在不同波长发射的颜色变体。
从下面GFP激发和发射波长图可得知,GFP的激发波长为300-510nm,主峰在488nm
增强型黄色荧光蛋白(EYFP)是黄色荧光蛋白突变体,有四个氨基酸发生突变,使得EYFP的发射光变为黄绿色,且荧光强度与EGFP荧光强度相似。mCitrine和mVenus在EYFP基础上改进的黄色荧光变体应用较为广泛。另外,还有一种经合成的DNA重排获得的能量转移黄色荧光蛋白YPet,亮度在黄色荧光蛋白中是***强的,且光稳定性较强。同时,YPet比mVenus或者其他荧光蛋白对于酸性环境的耐受能力更强。
从下面YFP激发和发射波长图可得知:
YFP的激发波长为300-520nm,主峰在505nm
由上可知,GFP和YFP的激发波长有重叠,YFP在GFP激发主峰488nm也能吸收足够的能量被激发,所以可以共用488nm激发波段的激发光源。但是从严格上来说,505nm才是YFP的激发主峰,激发效果比较好,所以一般不建议用488nm激发光源去激发YFP,如果YFP表达量不是很高的话,观察效果会很不理想。同理,对于其他的荧光蛋白也是一样的。
路阳仪器上海公司生产的激发光源有单波段,也有多波段。如果使用的488nm的单波段激发光源,则GFP和YFP不能共用激发光源;如果使用的是488nm和505nm双波段激发光源,则可共用激发光源。路阳仪器自主研发多种应该蛋白激发光源,可根据客户要求定制激发光源。产品介绍请浏览:GFP激发光源。
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