GFP/RFP/BFP/YFP荧光蛋白用什么激发光源?
GFP绿色荧光蛋白的发现为生物工程研究带来极大的便利,在GFP绿色荧光蛋白后,陆续又有了红色荧光蛋白RFP,蓝色荧光蛋白BFP,黄色荧光蛋白YFP……
绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)来自维多利亚水母,是荧光蛋白中应用***多的一种。GFP可在508nm处自行发射绿色荧光,无需辅助因子和底物。将GFP基因插入质粒作为一种手段,可以达到许多功能目的。
红色荧光蛋白 (red fluorescent protein, RFP) 是一种荧光团,在激发时会发出红橙色荧光。人们利用定向诱变技术开发了几种变体。***初的变体是从Discosoma中分离出来的,名为DsRed。红色荧光蛋白RFP约为25.9kDa。现在,红色荧光蛋白还有其他变体,它们发出橙色、红色和远红色荧光。
黄色荧光蛋白(Yellow Fluorescent Protein ,YFP)可以看做绿色荧光蛋白的一种突变体,***初来源于维多利亚多管水母( Aequorea victoria)。相对于绿色荧光蛋白,其荧光向红色光谱偏移,而这主要是由于蛋白203位苏氨酸变为酪氨酸。其更大激发波长为514 nm,更大发射波长为527 nm。
在基因编辑研究中,我们常用激发光源激发荧光蛋白发出荧光做相应的标识或表达,那么这些常见的荧光蛋白激发光源是哪些呢?
选择正确的激发光源,首先得知道荧光蛋白在什么样的激发波长下会发出荧光,即激发波长。常见荧光蛋白激发波长如下:
1)红色荧光蛋白RFP:激发波长532nm(绿光),发射波长588nm;
2)绿色荧光蛋白GFP:激发波长为 488 nm(蓝光或紫光),发射波长507 nm;
3)蓝色荧光蛋白BFP: 激发波长在400nm(紫)左右,发射波长在450nm左右;
4)黄色荧光蛋白YFP: ***大激发波长为514 (绿光)nm,***大发射波长为527 nm。
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